Рпга 1 640

Анализ крови РПГА относится к классическим способам диагностики, которые применяются уже многие десятки лет, но по-прежнему актуальны. Для чего в настоящее время проводится РПГА? Почему его иногда предпочитают современным методикам, и когда может столкнуться обычный человек с необходимостью такого исследования?

Наиболее современным методом современной лабораторной диагностики инфекционных заболеваний является полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая позволяет определить в любом биологическом материале, от крови и до соскоба со слизистых оболочек остатки генома, или уникального наследственного кода возбудителя болезни. Вторым методом диагностики является определение иммуноглобулинов класса М и G в крови пациента, которые свидетельствуют о развитии специфического иммунного ответа.

Что такое РПГА в анализе крови?

Этот способ исследования (реакция пассивной гемагглютинации, РПГА) имеет и второе название: реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). И в практике может встретиться как аббревиатура РПГА, так и РНГА. Что это за анализ? Для него необходима центрифугированная сыворотка крови пациента, которую совмещают с особым диагностическим реагентом. Классически он называется «эритроцитарный антигенный диагностикум». Для его приготовления долгие годы использовались клетки красной крови, или эритроциты. Но так было сравнительно давно, а в настоящее время биологический материал уже не используют, и вместо этого применяют микроскопические частицы латекса.

На эти частицы с помощью особой технологии наносят характерные для данного инфекционного возбудителя антигены, которые являются его «визитной карточкой». В результате получается множество частиц, на поверхности которых находятся адсорбированные, и крепко связанные с носителем активные молекулы антигена.

В том случае, если в сыворотке крови пациента находятся выработанные к данному возбудителю антитела, то эти частицы латекса или эритроциты, склеиваются антителами между собой, и выпадают в осадок, который называется агглютинацией (переводе означает «склеивание»). Эту реакцию ставят в специальных планшетах, которые выполнены из пластика и рассчитаны на небольшие объемы. А раньше анализ крови на РПГА проводилась с набором обычных пробирок. В них в разных разведениях находилась кровь пациента, к которой и добавляли диагностикум.

В некоторых случаях применяется зеркальный метод, когда диагностикум содержит не антигены, а антитела. Этот метод (РОНГА, или обратная гемагглютинация) применяется при поиске инфекции, при которых в крови циркулируют токсины, например при ботулизме. В таком случае, если у пациента в крови есть ботулотоксин, то он связывается со специфическими антитоксическими антителами диагностикумов, и также наблюдается реакция агглютинации, которую можно определить в зависимости от разведения сыворотки крови.

Расшифровка складывается из самого факта агглютинации, и того максимального разведения сыворотки крови, при которой она еще уверенно определяется. Чем больше разведена кровь, при которой еще есть агглютинация, тем больше в организме пациента находится антител, и тем выше специфическая напряженность иммунитета при классическом проведении этой реакции. Наиболее часто используется разведения от 1:20 до 1:160 и выше. В настоящее время непрямую РНГА чаще всего используют для первичной диагностики сифилиса.

РПГА при сифилисе

Анализ крови РПГА — что это при сифилисе? Это проведение реакции в ее классическом виде, при которой у пациента в сыворотки его крови выявляются циркулирующие антитела к возбудителю сифилиса. Этот способ является недорогим, быстрым, и позволяет первично использовать исследовать биологический материал для скрининга этой инфекции, для обследования доноров, сдающих кровь, для контактных лиц, близко общавшихся с больными.

Таким образом, РПГА при сифилисе является методом первичной неспецифической лабораторной диагностики. Но это вовсе не значит, что если такие антитела выявлены, то это анализ может считаться недостоверным. Выявление антител к бледной спирохете является основой лабораторной диагностики сифилиса и его подтверждения. И реакция пассивной гемагглютинации относятся к специфическим или трепонемный тестам, поскольку в нем используются «настоящие», сифилитические антигены.

После того, как к специфическому диагностикуму добавляется сыворотка крови, больного сифилисом, то происходит гемагглютинация. Эти циркулирующие в крови антитела могут появиться уже через 2 недели после заражения. В этом случае речь идет об антителах «быстрого реагирования», или об иммуноглобулинах класса М. Через месяц они дополняются специфическими иммуноглобулинами класса G. Поэтому при начале заболевания эта реакция определяет только один вид антител, говорящих об острой инфекции, а во вторичном и третичном периоде сифилиса она «улавливает» антитела класса G, которых в крови накапливается довольно много. Именно поэтому чувствительность этой реакции при дебюте заболевания несколько ниже, а если человек болен сифилисом несколько лет, то ее чувствительность приближается к 100% против 86% в случае первичного, свежего и недавнего сифилиса.

Эта реакция является высокоспецифичной и с ее помощью можно подтвердить или опровергнуть первичный диагноз, который был поставлен с помощью применения нетрепонемного теста. К таким нетрепонемным тестам относится RW или всем известная реакция Вассермана. При ее постановке в качестве антигена берется кардиолипиновый антиген, который не имеет никакого отношения к возбудителю. Он очень похож по своей структуре на сифилитический, но, все-таки, несколько отличается от него, и поэтому при этом виде исследования возможны ложноположительные реакции.

РПГА как метод переподтверждения

Поэтому в том случае, если у пациента при реакции Вассермана выявлено положительное ее значение, то для подтверждения или опровержения результатов RW необходимо выполнить реакцию пассивной гемагглютинации. Специфичность РПГА составляет от 96 до 100%. Даже при скрытом сифилисе без всяких проявлений она может также поставить диагноз с практически 100% вероятностью.

Поскольку правила диагностики сифилиса обязательно требуют переподтверждения первичного диагноза другим методом, то в том случае, если первичным методом диагностики является сама РПГА, то ее тоже необходимо переподтвердить, несмотря на ее высокую чувствительность, но уже только с помощью другого метода. И тогда используется тоже трепонемный тест, но только другой, например, нужно расшифровывать новые значения методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Значение при самых ранних сроках и при выздоровлении

Поскольку антитела, принадлежащие к классу иммуноглобулинов G, сохраняются в сыворотке крови, как правило, пожизненно, то даже после активного и успешного лечения сифилиса с последующим выздоровлением эти антитела остаются положительными. Только в том случае, когда сифилис заподозрили и пролечили в «самом зародыше», через несколько дней после заражения, на стадии формирования твердого шанкра и регионарного лимфаденита, то тогда РПГА может быть отрицательной.

Тот факт, что и при вторичном сифилисе, и при третичном РПГА будет одинаково положительной, то это значит, что такое исследование нельзя использовать для дифференциальной диагностики стадий заболевания. С помощью РПГА также невозможно оценить эффективность лечения, поскольку при этом антитела всё равно будут циркулировать в крови. Эффективность терапии необходимо оценивать с помощью других лабораторных анализов. Особенно высокие показатели, то и значительное разведение сыворотки крови пациента при проведении РПГА возникают при вторичном сифилисе, а также при ранней и скрытой форме этой болезни.

О ложноположительных значениях

Но, несмотря на высокую чувствительность и специфичность этого теста, также при проведении РПГА на сифилис возможны ложноположительные значения. Они возникают нечасто, не более чем в 2,6% случаев, и появляются при циркуляции в крови пациента антител, очень похожих на сифилитические, но не являющиеся ими. Это могут быть аутоантитела, и чаще всего такие «сюрпризы» подбрасывает системная красная волчанка.

Также те заболевания, которые вызываются другими представителями трепонем, или спирохет, могут приводить к ложноположительным значениям, например, болезнь Лайма, которую вызывает «близкая родственница» сифилиса Borrelia burgdorferi. О диагностике болезни Лайма, или клещевого боррелиоза, можно прочитать . В некоторых случаях, к таким искажениям приводит онкологическая патология, состояние беременности, и даже вялотекущий острый инфаркт миокарда. В последнем случае в кровь попадают частицы некротизированной сердечной мышцы, которые по своей структуре аналогичны кардиолипиновому антигену, он применяется для постановки реакции Вассермана, и извлекается из сердца крупного рогатого скота.

Также причиной ложноположительных результатов могут быть случаи внутривенной наркомании, ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты B и C, лептоспирозы и возвратный тиф, а также заболевания, которые встречаются в жарких странах и вызываются трепонемами — пинта, фрамбезия, беджель. В редких случаях, у пациентов с низким иммунитетом могут активизироваться трепонемы, которые относятся к сапрофитам и обитают в полости рта. Также туберкулез и инфекционный мононуклеоз могут быть причиной таких реакций, как и в случае обширной политравмы и многочисленных переломов.

Такие ложноположительные реакции необходимо перепроверять через некоторое время, обычно они исчезают в течение полугода, например, после разрешения беременности или в течение более длительного времени.

Подготовка и показания к РПГА

Подготовки к анализу никакой не требуются, единственное исключение сделано для курящих. Последняя сигарета должна быть выкуренной не раньше, через 30 минут до сдачи крови, а лучше вообще отказаться от курения в этот день. Забирается венозная кровь из локтевой вены, и показано проведение этого исследования четырем группам пациентов:

  • лицам, у которых есть симптомы и признаки сифилиса (к ним относятся вероятный шанкр, увеличение регионарных паховых лимфоузлов, непонятная кожная сыпь на фоне подозрительного анамнеза, вялотекущий менингит, диффузное облысение, симптомы сифилитической лейкодермы во втором периоде, либо подозрение на образование гумм, признаки спинной сухотки, звездчатые рубцы, говорящие о запущенном третичном сифилисе;
  • лица, находящиеся в половом и бытовом контакте с больными;
  • доноры;
  • оформление санитарной книжки, профилактические медицинские осмотры, плановая госпитализация в лечебное учреждение.

Пятой категорией лиц являются те пациенты, у которых была выявлена положительная реакция на сифилис, полученная другими методами диагностики, чаще всего реакцией Вассермана.

Интерпретация результатов РПГА на сифилис

В норме РПГА должно быть отрицательной, то есть гемагглютинации у пациента не должно возникать ни при каких условиях. В случае положительных результатов — это самая различная форма сифилиса, в том числе врождённый. Все остальные реакции относятся к ложноположительным, и о них уже говорилось выше. Лишь в редких случаях отрицательная реакция РПГА на сифилис может говорить о слишком рано взятом анализе при наличии инфекции, когда ещё не наработались антитела, то есть вплоть до 6 недели после заражения.

Анализ крови РПГА – одно из важнейших исследований, которое помогает определить наличие патогенных возбудителей в организме.

Метод РПГА очень часто используется при подозрении на сифилис, инфицирование кишечного тракта, коклюш и другие опасные патологии. Когда выписывается направление на подобное исследование, пациенты интересуются, как сдают биоматериал и насколько достоверные результаты дает методика. Об этом и пойдет речь далее.

Что такое РПГА и какие имеет особенности

Далеко не каждый человек знает, что это такое и как расшифровывается аббревиатура РПГА. Под этим сокращением подразумевается реакция пассивной гемагглютинации, методика нужна для определения патогенного процесса в организме.

Этот тест выявляет антигены бледной трепонемы (люис) – патогенного микроорганизма, провоцирующего возникновение сифилиса. Если обследуемый здоров и не страдает от каких-либо хронических заболеваний, при попадании в организм бледной трепонемы иммунитет начинает активно вырабатывать антитела.

Наличие в исследуемом биоматериале антител бледной трепонемы – основание для диагностирования сифилиса.

Условно тестирование на сифилис можно разделить на 2 вида:

  • специфическое;
  • неспецифическое.

Классификация анализа на категории зависит от вида антител, обнаруженных в полученном образце крови. Несмотря на то что впервые такой метод диагностики был проведен в 1965 году, тестирование оказалось настолько эффективным и результативным, что сегодня оно до сих пор не теряет актуальности.

Несомненным достоинством диагностики является то, что она позволяет обнаружить инфекцию на любом этапе развития, в том числе в латентной стадии.

Врачи советуют сдать анализ РПГА в следующих случаях:

  • у пациента проявляются клинические симптомы сифилиса (появление эрозий, язв, увеличение лимфоузлов) и регионарной лимфаденопатии; в этом случае РПГА на сифилис является незаменимым тестом, поскольку позволяет выявить болезнь на первичной, вторичной и третичной стадии;
  • возникновение признаков очаговой или диффузной алопеции;
  • если человек имел половой контакт с носителем сифилиса;
  • человек хочет стать донором, сдавать кровь и плазму;
  • РПГА входит в ежегодное профилактическое обследование, которое назначается работникам разных госучреждений;
  • при оформлении медицинской книжки;
  • при госпитализации.

Какие заболевания можно выявить в ходе диагностики

Чаще всего положительный результат теста свидетельствует о наличии сифилиса (в 70% случаев) — как врожденного, так и приобретенного, а также может говорить о таких патологиях:

  • ВИЧ-инфекция;
  • разные формы гепатита;
  • недавно перенесенный инфаркт миокарда;
  • возвратный тиф;
  • туберкулез;
  • наличие венерических заболеваний;
  • клещевой боррелиоз;
  • дифтерия;
  • диффузные заболевания соединительной ткани;
  • злоупотребление наркотическими веществами (вводимыми путем инъекций);
  • наличие воспалительного процесса в ротовой полости или в районе гениталий;
  • формирование новообразований злокачественной природы;
  • инфекционный мононуклеоз.

Чтобы получить достоверные сведения, сдавать кровь нужно с учетом всех врачебных рекомендаций, в противном случае возбудитель сифилиса может быть не выявлен.

Почему для диагностики сифилиса назначается именно РПГА

Часто пациенты задаются вопросом, почему при подозрении на сифилис назначают именно РПГА. Специалисты уверяют, что тестирование является столь популярным, поскольку в 99% случаев дает правильный результат.

Реакция агглютинации не произойдет, только если в организме отсутствуют антитела трепонемы, в противном случае обследование обязательно покажет их присутствие.

Медицинская практика показывает, что чувствительность теста очень высока, причем положительная реакция будет выявлена даже при скрытых стадиях заболевания. Благодаря высокой результативности тест не теряет актуальности даже в настоящее время.

Использование РПГА при других патологиях

Сдачу биоматериала на данное исследование часто назначают при подозрении на коклюш, на брюшной тиф, на иерсиниоз (острое инфекционное заболевание ЖКТ). Такая востребованность обусловлена тем, что по чувствительности и результативности РПГА превосходит практически все серологические анализы.

Тест помогает определить большую часть недугов, вызванных патогенными клетками и риккетсиями. При этом в роли антигенов можно использовать ингредиенты бактериальных вакцин, бактериальные экстракты (с коревым или коклюшным диагностикумом), очищенные антигены всевозможных микроорганизмов.

Основные преимущества метода

Данная методика активно используется по всему миру не только потому, что она является очень результативной, но и из-за определенных преимуществ:

  • проведение теста не представляет сложности, от пациента требуется лишь сдать кровь;
  • для проведения исследования не нужно специальное оборудование;
  • исследование не занимает много времени, обычно пациенту оглашают результат в течение 24 часов;
  • тест имеет высокую чувствительность и специфичность к сифилису.

Особенности проведения

Для осуществления тестирование требуется венозная кровь. Чтобы расшифровка была достоверной, пациенту необходимо ответственно подойти к подготовке к анализу и строго соблюдать врачебные советы.

Обычно специалисты рекомендуют придерживаться таких правил:

  • сдавать биологический материал разрешено только на пустой желудок;
  • перед мероприятием (если сдача крови осуществляется днем или вечером) разрешено пить только минеральную воду без газов, употреблять жидкость нужно в небольших объемах;
  • за пару часов до сдачи биоматериала запрещено курить;
  • категорически запрещено употреблять спиртные напитки за двое суток до процедуры;
  • если пациент принимает какие-либо лечебные препараты, об этом непременно нужно предупредить лечащего врача;
  • если человек чувствует себя плохо, забор крови лучше перенести на другой день, поскольку это может негативно сказаться на расшифровке результата.

Важнейшим этапом является подбор подходящей клиники. Кровь лучше сдавать в современном диагностическом центре с хорошей репутацией.

Как долго проводится анализ?

Точно сказать, как долго делается расшифровка результатов, невозможно. Скорость ее зависит от самого типа исследования, а также от применяемого оборудования.

Чаще всего РПГА расшифровывается в течение суток, но в некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней. Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

Чтобы выявить наличие патологии, к полученной крови нужно добавить специальную сыворотку. Если в организме человека присутствуют трепонемы, произойдет реакция агглютинации, вследствие чего эритроциты выпадут в осадок.

Число склеенных эритроцитов во многом зависит от того, какое количество антител присутствует в реагенте. Пассивная гемагглютинация показывает не только присутствие антител, но также дает медику возможность определить их количество.

Положительный результат

Если тест показывает положительную реакцию, это свидетельствует о присутствии возбудителя болезни. Чтобы поставить более точный диагноз, пациента нужно направить на дополнительную лабораторную и инструментальную диагностику.

Неотъемлемым этапом обследование является проверка всех членов семьи и людей, с которыми инфицированный человек вступал в половой контакт.

Как показывает медицинская практика, примерно у 5% пациентов в ходе тестирования проявляется ложноположительная реакция, что может произойти при игнорировании подготовительного этапа, а также при:

  • формировании онкологических новообразований;
  • патологии соединительной ткани;
  • наличии гепатита разных форм;
  • ВИЧ-инфекции.

Также слабоположительный результат может проявиться при беременности. Ложная «+” реакция практически всегда сопровождается низким титром. Интересным моментом является то, что если человек хотя бы раз болел сифилисом, реакция РПГА всегда будет положительной.

Исключение составляют только те случаи, когда сифилис был выявлен на ранней стадии и после этого сразу началась интенсивная терапия.

Отрицательный результат

Тестирование дает отрицательный ответ в таких случаях:

  • у пациента в организме отсутствуют патогенные микроорганизмы, являющиеся возбудителем сифилиса;
  • с момента заражения прошло менее 3 недель, и иммунитет еще не начал производить антитела;
  • забор крови из вены производился неправильно.

Даже если тестирование показало «-”, специалисты все же рекомендуют пройти дополнительные анализы для подстраховки, чтобы убедиться, что патогенные микроорганизмы отсутствуют.

Многочисленные клинические исследования подтвердили, что такое эта методика дает гарантированно правильный результат, если анализ проводился при соблюдении всех правил и пациент строго придерживался врачебных рекомендаций перед забором крови.

Если тестирование дало положительный ответ, вероятность того, что человек инфицирован сифилисом, составляет более 95%.

Неправильная реакция может проявиться только в тех случаях, если с момента инфицирования прошло слишком мало времени либо лаборант не соблюдал инструкцию при исследовании.

Что касается ложноположительного результата, то он может быть, если диагностика проводилась при наличии инфекционных заболеваний или патологических состояний.

Ложный результат отличается от истинного положительного тем, что он очень быстро становится отрицательным, если тестирование провести повторно через 2 недели.

На данный момент анализ РПГА до сих пор остается самым эффективным и достоверным тестом определения сифилиса и прочих опасных патологий. Поэтому при подозрении на наличие многих заболеваний первым делом медики направляют пациента на РПГА.

Практически каждому из нас ежегодно приходится сдавать свою кровь для проведения различных исследований. Один из таких тестов – РПГА. Его требуют пройти при оформлении санитарной книжки, его назначает сдавать терапевт, кровь для этого анализа берут у беременных и даже детей. Что это за анализ такой, и что он показывает?

Назначение

Выявление антител к вирусу кори в сыворотках крови людей и в препаратах иммуноглобулина человека.

Способ применения

Диагностикум применяют в реакции пассивной гемагглютинации.

Для постановки реакции дополнительно требуются следующие материалы и оборудование:

  • дистиллированная вода;
  • раствор натрия хлорида, 0,9 %, рН 6,6 — 7,2;
  • спирт этиловый ректифицированный технический;
  • пипетки одноканальные для подачи жидкостей на 5 — 40 мкл, 40 — 200 мкл, 200 — 1000 мкл и 1000 — 5000 мкл;
  • пипетки 8- или 12-канальные для подачи жидкостей на 5 — 40 мкл, 40 — 200 мкл;
  • наконечники полипропиленовые на 5 — 200 мкл, 200 — 1000 мкл и 1000 — 5000 мкл;
  • пробирки центрифужные полипропиленовые или стеклянные вместимостью 10,0 мл;
  • мерные стаканы вместимостью 50,0 – 100,0 мл;
  • ванночки для реагентов или стеклянные чашки Петри;
  • планшеты полимерные для иммунологических реакций однократного применения с лунками вместимостью 0,20 — 0,25 мл и U-образным дном;
  • спиртовка СЛ−1 или СЛ−2;
  • бумага фильтровальная листовая для просушивания.

Приготовление растворов для постановки реакции пассивной гемагглютинации

Приготовление рабочего 1 % раствора НКС

Для разведения диагностикума, испытуемых сывороток и иммуноглобулина человека используют 1 % раствор НКС.

Во флакон с НКС вносят 2,0 мл дистиллированной воды и выдерживают при температуре от 16 до 25 °С в течение 1 мин. — получают 2,0 мл 10 % НКС. Затем 10 % НКС разводят в 10 раз 0,9 % раствором натрия хлорида — получают 1 % раствор НКС. Например, к 18,0 мл 0,9 % раствора натрия хлорида добавляют 2,0 мл 10 % раствора НКС.

Допускается хранение неиспользованного 10 % раствора НКС при температуре от минус 8 °С до минус 12 °С в течение 2 недель. 1 % раствор НКС хранят при температуре от 2 до 10 °С в течение 1 сут. Плохо растворившуюся сыворотку для реакции не используют.

Приготовление рабочей 1 % суспензии КЭД

Во флакон с диагностикумом добавляют 2,0 мл дистиллированной воды. В течение 1 мин. образуется гомогенная коричневая 3 % суспензия, которую оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 2 ч для гидратации. При отстаивании образуется 2 слоя: прозрачная или слегка опалесцирующая надосадочная жидкость светло-желтого цвета и осадок коричневого цвета, разбивающийся при встряхивании. Для получения рабочей 1 % суспензии 3 % суспензию диагностикума разбавляют в 3 раза 1 % раствором НКС. Например, к 2,0 мл 3 % суспензии КЭД добавляют 4,0 мл 1 % раствора НКС.

Допускается хранение остатка 3 % суспензии диагностикума во флаконе при температуре от 2 до 10 °С в течение 24 ч.

1 % суспензия хранению не подлежит.

Приготовление 1 % суспензии акролеинизированных или формалинизированных эритроцитов барана

Для контроля испытуемых сывороток на полноту удаления бараньих изоагглютининов готовят 1 % суспензию эритроцитов из 30 % суспензии акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана (30 % суспензию акролеинизированных или формалинизированных эритроцитов перед применением отмыть 2 раза 0,9 % раствором натрия хлорида). После тщательного встряхивания к 0,1 мл 30 % суспензии эритроцитов добавляют 2,9 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Для контроля 90 сывороток необходимо не более 2,5 мл 1 % суспензии эритроцитов.

Допускается хранение остатка 1 % суспензии эритроцитов при температуре от 2 до 10 °С не более 7 суток.

Подготовка сывороток

Приготовление испытуемых сывороток

Испытуемые сыворотки должны быть прозрачными, светлыми, без признаков бактериального пророста и гемолиза. До серологического исследования их хранят при температуре от 2 до 10 °С или в замороженном состоянии при температуре минус 15 °С и ниже. Исследуемые сыворотки разводят 0,9 % раствором натрия хлорида 1:5 (к 0,1 мл нативной сыворотки добавляют 0,4 мл 0,9 % раствора натрия хлорида), прогревают при температуре 56 ± 1 °С в течение 1 ч и истощают 30 % суспензией акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана, которые перед этим тщательно встряхивают. 30 % суспензию эритроцитов добавляют в разведённую и прогретую сыворотку из расчёта 0,025 мл суспензии эритроцитов на 0,5 мл сыворотки, перемешивают и выдерживают при температуре 36 ± 1 °С в течение 1 ч или при температуре от 2 до 10 °С в течение 18 ч. Эритроциты осаждают центрифугированием при 1500 — 2000 об./мин. в течение 10 мин.

Приготовление положительного контроля – иммуноглобулина человека нормального

Иммуноглобулин человека нормальный разводят так же, как испытуемые сыворотки, — 1:5. Для этого из ампулы, содержащей иммуноглобулин, стерильно отбирают 0,1 мл и прибавляют к 0,4 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, получая, таким образом, рабочее разведение иммуноглобулина 1:5, которое используют в реакции без прогревания и обработки эритроцитами.

Неизрасходованный иммуноглобулин разливают стерильно по 0,1 мл и плотно закрывают пробками.

Допускается хранение разлитого по пробиркам иммуноглобулина при температуре от 2 до 10 °С не более 20 сут.

Постановка реакции

Для исследования 1 сыворотки используют 1 ряд лунок планшета.

В соответствии с количеством испытуемых сывороток в ряды планшета во все лунки многоканальной пипеткой вносят по 0,05 мл 1 % раствора НКС.

В первую и последнюю лунки каждого ряда вносят пипеткой по 0,05 мл подготовленных исследуемых сывороток и той же пипеткой, начиная с первой лунки, сыворотку перемешивают 5 раз и последовательно переносят во все лунки каждого ряда, кроме последней. Из последней лунки, в которой титровали сыворотку, удаляют 0,05 мл разведённой сыворотки. Разведение сывороток в первых и последних лунках получается, таким образом, 1:10.

Титрование иммуноглобулина человека нормального, входящего в комплект в качестве положительного контроля, производят точно так же, как испытуемых сывороток. Контроль иммуноглобулина ставят в 3-х параллельных рядах лунок планшета.

Во все лунки, кроме последней, каждого ряда многоканальной пипеткой вносят по 0,025 мл хорошо перемешанной 1 % суспензии диагностикума коревого эритроцитарного антигенного.

Обязателен контроль исследуемой сыворотки на полноту удаления бараньих изоагглютининов. Для этого в последние лунки каждого ряда, где содержатся по 0,05 мл исследуемой обработанной и разведенной 1:10 сыворотки, вносят по 0,025 мл хорошо перемешанной 1 % суспензии эритроцитов барана, приготовленной из 30 % суспензии формалинизированных или акролеинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана.

Обязателен контроль КЭД на отсутствие его спонтанной агглютинации в 1 % растворе НКС. Для этого в 4 лунки планшета вносят по 0,05 мл 1 % НКС и 0,025 мл 1 % суспензии диагностикума.

Обязателен контроль акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана на отсутствие неспецифической агглютинации в 1 % растворе НКС. Для этого в 4 лунки вносят по 0,05 мл 1 % НКС и 0,025 мл 1 % суспензии несенсибилизированных эритроцитов.

Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 2 ч до полного оседания эритроцитов в контроле.

Учет результатов

Учет результатов проводят по условной шкале четырех крестов:

В последних лунках каждого ряда (контроль сыворотки), где добавлена 1 % суспензия формалинизированных или акролеинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана, не должно быть агглютинации. При наличии агглютинации данная сыворотка должна быть повторно истощена.

В контрольных лунках с коревым эритроцитарным диагностикумом (контроль КЭД) в 1 % растворе НКС не должно быть агглютинации.

В контрольных лунках с акролеинизированными или формалинизированными несенсибилизированными эритроцитами в 1 % растворе НКС (контроль эритроцитов) не должно быть агглютинации.

Титром сыворотки или иммуноглобулина считают то последнее разведение, которое вызывает агглютинацию нагруженных коревым антигеном эритроцитов на два креста (++).

Сыворотки с титром 1:10 и выше расценивают как положительные.

При ретроспективной диагностике подтверждённым считают диагноз кори при наличии четырёхкратного и более нарастания титра антител при титровании парных сывороток: 1-ая из которых получена не позднее 3-го дня с момента появления сыпи, а 2-ая — через 3 недели после получения первой.

Титр коревых антител в иммуноглобулине человека нормальном (положительный контрольный образец) в РПГА должен соответствовать указанному на коробке комплекта с диагностикумом и выражен величиной разведения в МЕ/мл.

Титр коммерческих серий препарата иммуноглобулина устанавливают в Международных Единицах (МЕ).

Расчёт титра коревых антител в препаратах иммуноглобулинов в МЕ производят по следующей формуле:

Х = (а*с)/в, где:

Х — титр коревых антител в испытуемом иммуноглобулине в МЕ;
а — титр коревых антител в иммуноглобулине – положительном контрольном образце коревых антител в МЕ, указанный на этикетке коробки;
в — титр коревых антител в иммуноглобулине – положительном контрольном образце коревых антител, выраженный величиной обратной разведению, полученный в данном опыте;
с — титр коревых антител в испытуемом иммуноглобулине, выраженный величиной обратной разведению, полученный в данном опыте.

Условия транспортирования и хранения. Срок годности


array(19) { => string(6) «040503» => string(204) «Возбудитель сифилиса (Treponema pallidum), полуколичественное определение антител в реакции пассивной гемагглютинации» => string(1) «1» => string(1) «0» => string(6) «к.д.» => NULL => NULL => NULL => string(4) «2538» => string(4) «1433» => string(83) «vozbuditel-sifilisa-opredelenije-antitel-v-reakcii-passivnoj-gemagglutinacii_040503″ => string(291) » Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Ограничения в приеме биоматериала

» => string(4322) «

Метод исследования:

РПГА

Сифилис — инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передаваемое преимущественно половым путем. Заболевание характеризуется поражением кожи, слизистых оболочек, нервной системы, внутренних органов и опорно-двигательного аппарата, может протекать в скрытой форме. Продолжительность инкубационного периода в среднем составляет от 2 недель до 2 месяцев.

В диагностике заболевания применяют прямые методы (обнаружение возбудителя или его ДНК) и косвенные методы лабораторной диагностики (выявление в крови специфических антител).

Косвенные методы определения подразделяются на нетрепонемные (RPR, РМП) и трепонемные (ИФА, ИХЛА, РПГА, РИФ, иммуноблотинг).

РПГА — трепонемный тест определения антител к Treponema pallidum, используется в качестве скринингового и подтверждающего теста для диагностики сифилиса. Полуколичественный метод РПГА позволяет оценить уровень специфических трепонемных антител в крови.

Общие сведения

При попадании в организм возбудителя сифилиса иммунная система отвечает выработкой различных особых белковых соединений, выполняющих защитную функцию, антител. Среди этих образований находятся особые, специфические белки, ориентированные на уничтожение конкретного вида возбудителя заболевания. В случае сифилиса это будут антитела к бледной трепонеме. Серологическая диагностика заболевания основана на выявлении этих специфических белковых комплексов в сыворотке крови.

Для выявления сифилиса используется РПГА, реакция пассивной гемагглютинации. Также это исследование называется методом непрямой гемагглютинации или РНГА.

Метод заключается в смешивании сыворотки крови пациента со специальным реактивом для реакции пассивной агглютинации и дальнейшем перемешивании смеси в центрифуге не менее часа. Если красные кровяные клетки становятся тяжелыми от выпавшего на них осадка, состоящего из специфических антител на сифилис, то эритроциты выпадают в осадок на дне пробирки. В этом случае реакция считается положительной.

Тогда тестирование продолжается с применением метода разведения или титрования. Для этого сначала кровь пациента разбавляют водой в соотношении 1:1. Если результат положительный, то исследование продолжают, каждый раз увеличивая разведение вдвое. На основании последовательного выполнения таких процедур несколько раз, выставляют титр, указывающий на разведение, при котором был последний положительный результат.

Корректный результат возможен не ранее, чем через 4-6 недель после интимного контакта, во время которого возможно произошло заражение.

Диагностика сифилиса методом реакции непрямой гемагглютинации имеет ряд преимуществ. К таким относятся:

  • стандартизация исследования, позволяющая выполнять анализ при помощи специальной аппаратуры с использованием промышленных реактивов;
  • высокая точность, превосходящая все остальные методы. В случае первичного заболевания достоверность РПГА составляет примерно 98%. Если у больного вторичный или третичный сифилис, РПГА показывает результат с точностью 100%;
  • определение титра РПГА на сифилис позволяет косвенно оценить эффективность проводимой терапии. В случае излечения, несмотря на пожизненное присутствие антител в крови, с каждым контрольным анализом показатели разведения медленно убывают.

При подтверждении наличия сифилиса у пациента требуется дополнительное обследование на инфицирование другими заболеваниями, передающимися при интимных контактах. Необходимо сделать анализы и всем половым партнерам заболевшего и членам его семьи.

Перед выполнением процедуры испытания, необходимо подержать образец, разбавитель, контрольные и испытательные ячейки при комнатной температуре (25-30 ° C). Для каждого качественного теста требуется тестовая карта с тремя лунками. Положительный и отрицательный контроль следует проводить вместе с тестируемой сывороткой. При РПГА эритроциты, поверхность которых адсорбировала антигены бледной трепонемы, склеиваются друг с другом, то есть происходит их агглютинация.

A: Разведение образца сыворотки:

  1. Добавляется 10 мкл сыворотки пациента в первую лунку А.
  2. Затем присоединяется 190 мкл разбавителя.
  3. Содержимое перемешивается с помощью микропипетки (разведенная сыворотка используется позже).

B: Тестирование образца сыворотки на наличие специфических антител:

  1. Добавляется 75 мкл контрольных клеток в лунку B и 75 мкл тестовых клеток в лунку C.
  2. Прибавляется 25 мкл разведенной сыворотки в каждую лунку B и C.
  3. Аккуратно встряхивается пластина, чтобы тщательно перемешать содержимое.
  4. Ячейки накрываются для защиты от прямых солнечных лучей, тепла и любых источников вибрации.
  5. Инкубируются 45-60 минут при комнатной температуре.
  6. Затем происходит интерпретация результатов.

Показания к анализу

Тест проводится с диагностической целью при подозрении на сифилис или при ежегодных профилактических осмотрах. Однозначным поводом для проведения РПГА является положительный результат других неспецифических методов определения заболевания. В этом случае пассивная гемагглютинация даст не только достоверное подтверждение или опровержение факта наличия инфекции, но и поможет определить стадию болезни.

Также к показаниям к назначению РПГА с целью выявления сифилиса относятся:

Любой человек с признаками или симптомами заболевания, должен быть проверен на сифилис. Некоторым пациентам следует пройти скрининг, даже если у них нет симптомов или они знают о сексуальном партнере, который инфицирован. Сексуально активные люди, могут обсудить свои факторы риска с врачом и спросить, какие необходимо сдать анализы на сифилис или другие ЗППП.

К числу наиболее подверженных риску относятся:

  • те, кто занимается незащищенным сексом;
  • пациенты с ВИЧ;
  • люди с многочисленными сексуальными партнерами.

Когда у беременной женщины диагностирован сифилис, инфекция может быть передана ее будущему ребенку. Все беременные женщины должны быть проверены при первом дородовом посещении.

РПГА при сифилисе является методом первичной неспецифической лабораторной диагностики. Это самый часто используемый анализ во всем мире для скрининга. Исследование применяется из-за его простоты, чувствительности и доступности. РПГА имеет количественные данные о титре антител. Эта оценка обладает необходимым значением в будущем лечении.

Лица с положительным нетрепонемным тестом, к ним относится RW или всем известная реакция Вассермана, всегда должны проходить трепонемный анализ для подтверждения диагноза сифилиса. Эта цепочка процедур считается классическим алгоритмом тестирования.

Подготовка к исследованию

Чтобы тест показал достоверные результаты, пациент должен провести несложную подготовку к РПГА.

Перед сдачей крови для анализа методом пассивной гемагглютинации требуется:

  • за трое суток до посещения лаборатории полностью исключить употребление алкогольных напитков любой крепости. Даже небольшое содержание спирта в организме приведет к получению искаженных результатов, затрудняющих диагностику. Чтобы не пропустить патологию или не поставить диагноз сифилис здоровому человеку, в этом случае потребуется проведение дополнительного обследования;
  • за три дня до анализа избегать физического переутомления, а также любого психоэмоционального напряжения;
  • за сутки до сдачи крови исключить употребление в пищу жирной и жареной пищи. «Тяжелое» питание будет способствовать изменениям показателей анализа;
  • за 12 часов до посещения лаборатории нужен полный отказ от употребления любой еды;
  • для получения достоверного результата в день исследования запрещается курить, пить чай, кофе и другие напитки.

В день сдачи анализа разрешается только выпить немного чистой негазированной воды без вкусовых добавок.

Выписывая направление на РПГА крови на сифилис, врач должен подробно рассказать пациенту о правилах подготовки к анализу, поставить в известность о возможности получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. В таких случаях потребуется повторная сдача крови в лабораторию для получения контрольных результатов.

Следует иметь в виду, что при несвоевременном лечении заболевания после выздоровления результат остается положительным на всю жизнь.

Что может повлиять на результат

Результаты теста могут быть ложно-положительными по многим причинам. На результат анализа, влияют некоторые заболевания. К ним относятся риккетсиозные инфекции, такие как сыпной тиф или пятнистая лихорадка Скалистых гор. Результаты могут быть неточными, если скрининг проводится слишком рано после заражения инфекцией. Через 14–21 день после заражения иммунный ответ организма обнаруживается с помощью теста. Употребление алкоголя в течение 24 часов до теста также может дать ложно-отрицательный результат.

Факторы влияющие на результат анализа:

  • беременность;
  • внутривенное употребление наркотиков;
  • туберкулез;
  • хронические заболевания печени;
  • недавние прививки или воспаление слизистой оболочки сердца или клапанов.

Рекомендация!

При расшифровке крови на РПГА, убедитесь, что врач знает обо всех лекарствах, травах, витаминах и добавках, которые принимаете. Это включает препараты, не нуждающиеся в рецепте, и любые запрещенные наркотики.

Где сделать анализ и стоимость?

Тест пассивной агглютинации можно провести в клинических лабораториях кожно-венерологических диспансеров и других специализированных центров. Также такие исследования можно пройти в коммерческих лабораториях. Стоимость анализа РПГА на сифилис зависит от региона и составляет в среднем примерно 400 рублей.

Результаты реакции пассивной гемагглютинации являются наиболее точными и максимально информативными из всех методов лабораторной диагностики сифилиса. Поэтому узкопрофильные врачи наиболее часто используют именно этот метод для выявления заболевания, определение стадии его развития, а иногда и с целью косвенного определения эффективности проводимой терапии.

Какие существуют методы для выявления сифилиса?

Есть много анализов, которые позволяют выявить бледную трепонему или следы ее присутствия. Разные тесты могут использоваться на разных этапах. Существуют также менее информативные, т.н. скрининговые тесты и более подробные – специфические.

Можно рассматривать другую классификацию тестов:

Прямые тесты обнаруживают микроорганизм или его ДНК, а непрямые лишь косвенные признаки наличия паразита в крови.

РПГА относят к специфическим непрямым тестам. РПГА – серологическая реакция, т.е. основання на взаимодействии антитела с подходящим к нему антигеном. Этот метод считается одним из самых чувствительных.

Серологические реакции проводятся специалистами, однако существуют аналогичные тесты для домашнего проведения анализов. К ним прилагается инструкция, которую необходимо тщательно соблюдать, чтобы не нарушать результатов.

При наличии положительного анализа не следует предаваться панике: тест может выдавать ложноположительный результат.

РПГА служит для выявление антител сыворотки крови, которые образовались в ответ на проникновение бледной трепонемы в кровь. Определение антител проводят с помощью эритроцитарного диагностикума.

Эритроцитарный диагностикум представляет сбой эритроциты с адсорбированными на них антигенами к соответствующим антителам.

Если антитела сыворотки крови соединятся с антигенами, то произойдет и опосредованное склеивание эритроцитов, а в пробирке/лунке будет образовываться хлопьевидный осадок. Если же осадок не образуется, значит, реакция отрицательная и человек не болен сифилисом.

Несмотря на то что РПГА анализ крови применяется уже более 10 лет, это тестирование до сих пор не утрачивает актуальности. При помощи процедуры можно выявить разные патологические процессы, но чаще направление на анализ выдается при подозрении на сифилис и инфекционные заболевания органов желудочно-кишечного тракта. При выдаче направления на исследование нужно разобраться в том, как сдавать кровь и насколько точным является тестирование.

Особенности анализа

Из 10 человек расшифровку анализа крови РПГА знают не более половины. Под этой аббревиатурой подразумевается реакция пассивной гемагглютинации. Методика применяется для выявления внутренних патологических процессов, но особенно она эффективна при подозрении на сифилис.

Это обусловлено тем, что тест точно определяет антитела бледной трепонемы – микроорганизма, провоцирующего развитие сифилиса. При попадании в здоровый организм этого возбудителя иммунная система начинает активно вырабатывать антитела против него. Если тестирование показало присутствие возбудителя, пациенту нужно незамедлительно сдать дополнительные анализы на сифилис.

Условно тестирование можно разделить на 2 типа:

  • специфическое;
  • неспецифическое.

Классификация варьируется от типа антител, которые были выявлены в сыворотке крови. Главное преимущество анализа крови на РПГА заключается в том, что при помощи него можно выявить заболевание, вне зависимости от того, на каком этапе оно находится.

Преимущества РПГА

Тест РПГА проводят во всем мире не только из-за высокой точности и достоверности, но и из-за следующих достоинств:

  • процедура отличается простотой. Все, что необходимо сделать пациенту, – сдать кровь;
  • отсутствие необходимости использования специального дорогостоящего оборудования;
  • быстрая расшифровка. Обычно результат оглашается уже через сутки после сдачи биоматериала.

Показания к тестированию

В целях профилактики медики рекомендуют сдавать кровь на РПГА каждый год. Абсолютными показаниями к проведению такого тестирования являются:

  • проявление симптомов сифилиса. Основные признаки этого заболевания – возникновение эрозий и язв на кожном покрове (в особенности в области половых органов), увеличение лимфоузлов, частичное поредение волосяного покрова;
  • появление симптомов алопеции разных видов (патологическое облысение);
  • незащищенный половой контакт с предполагаемым носителем болезни.

Также тестирование в обязательном порядке назначается людям, которые хотят сдавать кровь как доноры. Кроме вышеперечисленных ситуаций, подобный анализ назначается при оформлении медкнижки и при определении человека в стационар. Также медик может выписать направление на РПГА анализ при подозрении на дифтерию, дизентерию или сальмонеллу.

Что показывает анализ

В большинстве случаев положительный результат РПГА указывает на сифилис врожденной или приобретенной формы. Также при помощи тестирования можно обнаружить следующие патологии:

  • вирус иммунодефицита человека;
  • гепатит;
  • возвратный брюшной тиф;
  • туберкулез легких;
  • дифтерия;
  • коклюш;
  • воспалительные поражения слизистых оболочек ротовой полости и гениталий;
  • формирование новообразований злокачественного происхождения;
  • мононуклеоз инфекционной природы;
  • диффузные поражения соединительных тканей;
  • венерические заболевания.

Чтобы тестирование показало достоверный результат, сдавать биоматериал нужно, соблюдая все врачебные рекомендации. В противном случае возбудитель может быть не обнаружен.

Многих интересует вопрос, почему при подозрении на сифилис назначается именно анализ РПГА. Популярность такого тестирования в диагностике этой опасной болезни обусловлена его достоверностью. Медики уверяют, что анализ показывает правильный результат в 99% случаев.

При отсутствии антител бледной трепонемы реакция агглютинации не произойдет, что говорит о том, что человек здоров.

Стоит учитывать, что чувствительность такого теста очень высока, поэтому обнаружить возбудитель сифилиса удастся даже на скрытых стадиях заболевания.

Сдачу образца на такое тестирование назначают и при подозрении на другие болезни, например, коклюш или иерсиниоз. Востребованность анализа обусловлена тем, что по сравнению с другими серологическими тестированиями он более чувствителен, что увеличивает вероятность получения достоверного результата.

Как проводится процедура

Для осуществления анализа подходит только венозная кровь. Чтобы тестирование показало точный результат, пациенту требуется подготовиться к нему и придерживаться следующих рекомендаций:

  • кровь сдают исключительно на голодный желудок, поэтому есть можно не позднее, чем за 10 часов до процедуры. Единственное, что допускается – выпить утром стакан воды;
  • за 3 часа до забора крови нельзя курить;
  • если пациенту назначен прием лекарственных средств на постоянной основе, об этом нужно оповестить врача, который будет проводить расшифровку анализа.

В большинстве случаев расшифровка результата занимает не более суток, но иногда длится до 4 дней. Срок может незначительно меняться в зависимости от лаборатории и типа используемого оборудования.

Расшифровка результата

Анализ проводится путем добавления к образцу специального реактива. При наличии в крови бледной трепонемы происходит реакция агглютинации, и эритроциты выпадают в осадок. По числу склеенных эритроцитов можно делать выводы о том, сколько антител присутствует в образце.

Результаты тестирования оцениваются по 4-балльной системе, по размеру сформировавшейся пленки. При появлении реакции агглютинации эритроциты остаются на поверхности лунки, образуя собой «зонтик». При отрицательном результате они опускаются вниз и скапливаются на дне в центре лунки.

Результат тестирования расшифровывается таким образом:

  • «-» – отрицательный результат. При нем красные кровяные тельца опускаются на дно, образуя компактный осадок;
  • «1+» – неоднозначная реакция. Эритроциты формируют неплотный осадок с нечеткими краями и просветом в середине;
  • «2+» – слабоположительная реакция. Внизу лунки появляется пленочка, образуя плотное кольцо с выраженным просветлением в центре;
  • «3+» – положительная реакция. Красные кровяные тельца почти целиком застилают лунку, при этом вокруг осадка образуется четкое кольцо;
  • «4+» – положительная реакция. При РПГА 4+ эритроциты формируют зонтик и равномерно застилают лунку.


Вот как могут выглядеть результаты теста РПГА

Если тестирование дало положительную ответную реакцию, это говорит о присутствии в организме возбудителя болезни. В этом случае пациенту назначают дополнительные лабораторные и инструментальные анализы, отталкиваясь от которых можно будет подтвердить или опровергнуть наличие заболевания.

При положительном результате сдать анализ РПГА необходимо провести человеку, с которым инфицированный вступал в половой контакт. Стоит учитывать, что примерно в 5% случаев анализ РПГА дает ложноположительный результат. Чаще всего это связано с игнорированием правил подготовки.

Также ложноположительная реакция может проявиться в следующих случаях:

  • формирование онкологических новообразований;
  • гепатит разных форм;
  • ВИЧ.

В редких случаях ложноположительная реакция является признаком беременности. Отличительная особенность ложноположительного ответа – он сопровождается низким титром. Также стоит учитывать, что анализ может быть положительным, если пациент уже был болен сифилисом, но прошел успешное лечение.

Отрицательная реакция РПГА говорит о том, что:

  • возбудитель сифилиса отсутствует в организме;
  • с момента инфицирования прошло менее 3-х недель. На столь раннем этапе иммунная система не начинает выработку антител;
  • неправильное проведение забора крови.

Если врач подозревал сифилис у пациента, но тестирование показало отрицательный результат. Через некоторое время рекомендуется сдать анализ повторно, чтобы убедиться в отсутствии патогенных микроорганизмов в сыворотке крови.

Насколько достоверен анализ

В ходе клинических исследований было выявлено, если забор крови осуществлялся должным образом и пациент соблюдал все правила по подготовке к процедуре, анализ не покажет ложный результат.

Если РПГА показало положительную реакцию, вероятность того, что человек является носителем сифилиса, составляет более 97%. Что касается ложноположительного ответа, то он может проявиться, если тестирование осуществлялось во время инфекционного заболевания или другого патологического состояния.

Сегодня реакция пассивной агглютинации является преимущественной и по результативности превосходит все остальные тестирования. Несмотря на то что методика чаще всего применяется для обнаружения антител бледной трепонемы, при помощи нее можно выявить и другие заболевания инфекционного происхождения. Важно помнить, что результат тестирования зависит не только от методики проведения теста, но и от того, насколько правильно пациент подготовится к процедуре.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *